Seguem abaixo dois comentários sobre artigos de detecção de leishmania por PCR em tempo real. O primeiro deles
foi publicado em marco deste ano, com o título de Molecular diagnosis of Old World Leishmaniasis: Real-time PCR based on
tryparedoxin peroxidase gene for the detection and identification of Leishmania
spp. Escrito Sharifeh Khosravi e colaboradores, todos provenientes do Irã, e
é incrível como o Irã tem aparecido cada vez mais nos periódicos científicos. Segundo a
revista Galileu (revista de circulação aberta e popular no brasil). “Qual país teve um "boom" de produção científica entre 1996 e
2008, saltando de 736 artigos publicados para 13.238? A resposta - o Irã - pode
surpreender muitas pessoas, especialmente nos países ocidentais acostumados a
liderar a maioria das pesquisas científicas. O Irã, no entanto, tem a maior
taxa de crescimento na publicação de artigos científicos no mundo”...“E se as relações políticas entre o Irã e os EUA estão tensas, parece
que os cientistas dos dois países estão se relacionando sem problemas: o número
de trabalhos colaborativos entre eles aumentou quase cinco vezes (de 388 para
1831) no período estudado”... “A rápida ascensão do Oriente Médio, da China, da Índia e do Brasil no
campo da ciência se destaca em um relatório publicado nesta semana pela Royal
Society do Reino Unido, comparando a publicação global e as taxas de citações
entre 1993 e 2003 com as taxas de citação entre 2004 e 2008”. Leia aqui.
Neste artigo
cientifico é confirmada mais uma vez pelos autores a alta sensibilidade das
técnicas moleculares em se identificar a presença do parasito. Porém, o
diferencial deste trabalho é o alvo escolhido, que é o tryparedoxin peroxidase uma enzima presente nos tripanossomátideos
que os protegem contra o stress oxidativo (aqui). Este gene está presente na Leishmania major em três cópias, em tandem no
cromossomo 15 (Multicopy gene in tandem array, expressed
in all life cycle stages (PMID:9632596), (PMID:9851612); Preferentially oxidise
the sulphydrl groups on conserved cysteine residues (PMID:8386507). O ponto alto do texto é a adição de mais um gene a grande lista de
possíveis marcadores para se detectar a Leishmania
spp.
O outro artigo é de Weirather, do grupo da Mary
E. Wilson: Serial
Quantitative PCR Assay for detection, species discrimination, and
quantification of Leishmania spp. in Human Samples. Publicado na Journal of
clinical microbiology. Nov. 2011. Este artigo é muito denso e completo, selecionado por mim como um trabalho de
cabeceira para implementação de técnicas de PCR para detecção do parasito. Inicialmente
os autores descrevem os genes mais utilizados para detecção de Leishmania por
PCR em tempo real, “visitando toda a vizinhança” do kDNA (tanto o mini como o
max círculos) a polimerase. O texto também explica a variação da sensibilidade
das reações a depender do número de cópias do alvo e os autores padronizam uma corrida com o
SYBR e com sondas Taqman para identificação das espécies de Leishmania através da análise
da curva de dissociação.
Um ponto
importante do artigo é o teste das amostras, mostrando que a metodologia
aplicada é sensível o suficiente para trabalhar com as amostra dos pacientes de
área endêmica e o experimento de Stage-Conversion,
mostrando que estes genes mudam seu número de cópias a depender do estágio em
que a Leishmania se encontra. Assim, os alvos de amplificação localizados no minicírculo são constantes, independente
de onde se encontre a leishmania (flebotomieo ou dentro do macrófago) enquanto
que os alvos do maxicírculo são diferenciáveis (no flebotomieo e no macrófago).
O artigo também especula a
possibilidade do parasito estar infectando bolsas de sangue, que foi material
de estudo do meu mestrado. Ficamos por aqui
até a próxima pessoal.
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