MAP kinase 10 de Leishmania major protege contra infecção experimental por L. major

Post de Sarah Falcão (LIP-CPqGM-FIOCRUZ)

Leishmania spp. pode causar desde lesões cutâneas que curam espontaneamente, a leishmaniose visceral disseminada. Há drogas liberadas para o tratamento, contudo, existe o problema da toxicidade e baixo índice terapêutico. Assim como todas as doenças infecciosas, a prevenção da leishmaniose por uma vacina profilática é superior à cura quimioterapêutica. As MAP kinases são os sinalizadores intermediários mais antigos e conservados evolutivamente e que executam papel crucial na cascata de sinalização e funções efetoras nos macrófagos. Portanto, a MAP kinase da Leishmania é um antígeno importante capaz de afetar a sinalização das células hospedeiras, sendo assim, um forte candidato à vacina. Das quinze MAP kinases da Leishmania foi escolhida a LmjMAPk10 para ser testada neste trabalho. Com esse objetivo, o gene da LmjMAPk10 foi clonado em um vetor de expressão em mamífero (pCDNA6-His A) para expressar em camundongo e um vetor de expressão (pET28a+) para purificação da proteína. Foi usada a proteína LmjMAPk10 ou o DNA sozinho ou a combinação de ambos para acessar a eficácia da proteção no modelo experimental de infecção por L. major no camundongo BALB/c.

Inicialmente, os autores viram a expressão da proteína LmjMAPk10 em formas promastigotas e amastigotas por Western blotting. Para determinar a resposta humoral específica para a proteína LmjMAPk10, camundongos BALB/c foram inoculados com LmjMAPk10 e, em seguida, foram infectados com 2x10⁶ L. major na pata. Cinco semanas após, foi observado no soro um aumento nos níveis de IgG1 e igG2a nos grupos imunizados comparado aos controles. Como IgG1 é induzido pela IL-4, uma citocina Th2 e, por sua vez, a IgG2a é induzida pelo INF-g, uma citocina Th1, esse resultado sugere que há ativação de células Th1 e Th2 simultaneamente pela imunização com a LmjMAPk10. Por isso, cinco semanas após a infecção, foi acessada a produção dessas citocinas pelas células do LN dos camundongos imunizados+infectados e do grupo controle apenas infectado.

A imunização resultou numa significante diminuição de IL-4, mas um aumento de INF-g e um pequeno aumento de IL-10. Com a mensuração da lesão foi observada a menor lesão no animal imunizado com o DNA e, em seguida, com a proteína, contudo, esses dois grupos não tiveram diferenças significantes. A carga parasitária foi reduzida em todos os grupos experimentais quando comparado com o controle, entretanto, o grupo imunizado com a proteína apresentou a menor carga parasitária, seguido pelos grupos proteína+DNA e DNA sozinho. Os resultados mostraram que a imunização com a proteína ou com o DNA apresentaram maior proteção contra a infecção por L. major e os níveis de proteção são equivalentes entre estas duas estratégias e, portanto, claramente indicam que a LmjMAPk10 é uma provável candidata à vacina.

Kumari S, Singh S, Saha B, & Paliwal PK (2011). Leishmania major MAP kinase 10 is protective against experimental L. major infection. Vaccine PMID: 21527301