sexta-feira, 30 de setembro de 2011

Análise do transcriptoma de leishmanias por seqüenciamento do RNAm


Comentários do Congresso da SBPz - 19 a 21 de setembro de 2011, Foz do Iguaçu



Post de Leonardo Arruda

Sobre a palestra de Myler PJ
A disponibilização do genoma de várias espécies de Leishmania revolucionou a habilidade para investigar a biologia e fisiopatologia destes parasitas. Entretanto, nem todos os mecanismos para regulação da expressão gênica foram elucidados.

Buscando contribuir neste campo, os autores analisaram todo transcriptoma de diferentes espécies de leishmania (L. major, donovani, amazonensis, braziliensis e tarentolae), utilizando uma nova tecnologia denominada seqüenciamento de RNA de alto rendimento (RNA-seq), com a finalidade de analisar os níveis dos RNAm e suas sequências nas diferentes fases do ciclo celular.
Foram desenvolvidas diferentes formas para a construção de bibliotecas para RNA-seq. Entre elas, aquela com resultados mais surpreendentes foi o mapeamento da região final 5’ dos mRNAs. Esta abordagem foi tão sensível, que foi possível a utilização do RNA total oriundo de extração de macrófagos infectados ou diretamente do RNA extraído da lesão de animal. Além disso, foram obtidas informações sobre o local de adição da SL (Sequencia Líder – lembrar que no trans-splicing ocorre a adição da SL na porção 5’ e a poli-adenilação na porção 3’ em cada gene) bem como abundância do mRNA para cada espécie / fase do ciclo.

Os resultados obtidos foram impressionantes, pois foi observado uma mudança no sítio de adição da SL durante a diferenciação celular. Por precisamente definir as terminações 5’ e 3’ dos mRNAs, estes resultados permitiram redefinir anotações estruturais no genoma destas espécies. Sendo assim, muitos genes anteriormente ditos como ortólogos tiveram sua função designada.
Os resultados deste estudo permitirão o melhor entendimento sobre a biologia da leishmania, como início e término da transcrição. Os autores ainda estão comparando os sítios de adição da SL bem como a abundância do mRNA entre as espécies. 

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